D&J Club之学术讲座第三期

    2013年11月7日下午三点，第三期D&J Club之学术讲座在新科研研楼703教室举行。这期的主讲人是葛薇课题组2012级硕士生高延盼和许海燕课题组2010级博士生张卫奇，两人报告的内容分别是：利用质谱技术分析巨噬细胞在免疫应答过程中溶酶体蛋白质组的变化和纳米金材料作为shRNA载体的应用及其与细胞相互作用的研究。
    高延盼同学作为硕士二年级的学生，是D&J Club 现有主讲人中年级最低的同学。目前的工作还主要停留在分子筛选层面，因此涉及的实验还不是非常深入，也还暂时没有涉及具体的分子机制。但她的演讲非常自信，也愿意为大家分享自己的经验。一个硕士二年级的同学站在D&J Club的讲台上就足以证明实力，只要积极进取，踏实勤奋，成功不必在年高。第二个报告是2013届毕业生张卫奇博士，他全面系统地为大家介绍了五年来自己在纳米金材料作为shRNA载体方面的研究，同时也和大家分享了自己的科研经历，如何从实验本身中发现问题然后去探索并解决。张卫奇以个人孜孜不倦的努力告诉我们学贵于精，只有专注用心才能发现新的精彩领域。
    本期讲座有高年级同学也有低年级同学，这样可以使同学们能更好地进行跨年级的交流学习。

Section one
Q1: 质谱中，同位素稳定标记TMT标记和iTRAQ有什么不同之处吗，为什么选用TMT标记？
A: TMT和iTRAQ在标记原理上是相同的，他们的mass normalizer group 和 protein reactive group化学结构是相同的，只是mass reporter有稍微差异，使得TMT可以同时标记2、6或10个样品，而iTRAQ可以分别标记2、4或8个样品，另外TMT和iTRAQ需要不同公司的质谱仪，TMT需要Thermo的质谱仪，iTRAQ需要AB的质谱仪。我们所用的质谱仪是Thermo Q Extractive，所以用TMT。

Q2: 酸性磷酸酶实验结果图中，峰值最高的fraction 4 认为是溶酶体，但是7-8 fraction也出现一个小峰是什么原因呢？能确定那一部分是什么吗？
A: 虽然酸性磷酸酶是溶酶体的标志酶，但文献报道它在线粒体中也有表达，但酶含量低于溶酶体，所以7-8 fraction认为是线粒体中酸性磷酸酶活性产生的。
大多是线粒体。

Section two
Q1：目前基于siRNA的疾病治疗方式的研究进展？
A: 由于siRNA在针对各类疾病的治疗上具有巨大的应用潜力，因此siRNA递送载体的研究也非常热。目前，大概有22个基于RNAi作为治疗策略的临床试验正在进行，大多数都是在临床I或II期。其中主要针对的疾病有肿瘤和病毒感染等。

Q2：为什么选用普鲁兰精胺作为siRNA递送载体？做RNAi试验的时候相应的阴性对照是怎么设置的？
A：普鲁兰本身是一种天然多糖，是生物可降解的。经过精胺修饰获得的普鲁兰精胺可以通过静电相互作用吸附siRNA分子，同时生物可降解性保证其毒性不会很大。阴性对照选用了NC siRNA或者单独加相应的纳米材料。其中NC siRNA其序列组成与目的siRNA分子碱基组成一致但是在细胞内没有任何靶标。

Q3：金纳米棒被细胞排出之后可以重新内吞进入细胞，是否意味着金纳米棒长期处于细胞内可能引起细胞毒性？
A:在体外静态培养条件下，外排的金纳米棒的确可以通过内吞重新进入细胞，但是细胞增殖的同时可以有效地将细胞内的金纳米棒稀释。构成金纳米棒的金本身是化学惰性的，因此观察到金纳米棒的细胞毒性相对较低。而在体内情况下，可能与体外静态培养具有一定的差异。因为体内环境下存在新陈代谢和体液交换，因此外排的金纳米棒还是有可能代谢掉。

Q4：是否低血清下或促进RNAi效应使用于所有的siRNA转染载体？
A：如果使用的转染载体与普鲁兰精胺类似，均为阳离子多聚物的话应该是可以通过降低血清来调控RNAi效率的，但是需要注意的是在降低血清浓度的同时可能导致转染时细胞毒性较大。